NY_T 3050-2016 羊奶真实性鉴定技术规程

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ics 67.100.01 NY,中华人民共和国农业彳亍业标准,NY/T 3050—2016,羊奶真实性鉴定技术规程,Code of practice for adulteration in goat milk product,201672-23 发布2017-04-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY/T 3050—2016,—1—,刖 a,本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草,本标准由农业部畜牧业司提出,本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC 274)归ロ,本标准起草单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶产品质量安全风险评估实验室,(北京)、青岛农业大学、安徽农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所,本标准主要起草人:郑楠、屈雪寅、杨晋辉、杨永新、胡茜、周雪巍、李松励、叶巧燕、于建国、文芳、许,晓敏、韩荣伟、张养东、程建波、王加启,I,NY/T 3050—2016,羊奶真实性鉴定技术规程,1范围,本标准规定了聚合酶链式反应(PCR)方法、二维凝胶电泳(2-DE)法及酶联免疫吸附(ELISA)法,对生羊奶、超高温灭菌(UHT)液态羊奶和羊奶粉中掺入牛源性奶成分的定性检测方法,本标准第一法和第二法适用于生羊奶、UHT灭菌液态羊奶及羊奶粉;第三法适用于生羊奶,本标准第一法的检岀限为:生羊奶中掺假2. 〇%生牛奶,生羊奶掺假0. 2%牛奶粉,UHT液态羊奶,掺假5. 0% UHT液态牛奶,羊奶粉掺假2. 0%牛奶粉;第二法的检出限为生羊奶掺假5. 0%生牛奶,生,羊奶掺假1. 0%牛奶粉,UHT液态羊奶掺假5. 〇% UHT液态牛奶,羊奶粉掺假2. 0%牛奶粉;第三法,的检出限为生羊奶掺假0. 1%生牛奶,2规范性引用文件,下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文,件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件,GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法,第一法聚合酶链式反应(PCR)法,3原理,提取奶及奶制品中体细胞DNA,利用牛特异性的引物通过PCR扩增牛特定的DNA序列,电泳分,离PCR产物,以牛源性成分PCR产物作对照,初步判断是否含有牛源性奶成分。通过对PCR扩增的,特定DNA片段进行测序,与标准序列进行比较,确认检测结果,4试剂和材料,除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂,水应符合GB/T 6682 ー级水的要求,4. 1无水乙醇,4.2 75%乙醇,4.3 三羟甲基氨基甲烷(Tris),4.4 琼脂糖:电泳级,4.5 蛋白酶 K:20g/L,4.6 核酸荧光染料,4. 7 DNA 分子量标记(Marker) :50 bp~500 bpo,4.8牛源性成分检测用引物(对)序列:,正向:5'- GCCATATACTCTCCTTGGTGACA- 3’;,反向:5'- GTAGGCTTGGGAATAGTACGA- 3,,4. 9磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液):分别称取磷酸二氢钾0. 27 g、磷酸氢二钠!. 42 g、氯化钠8. 0 g、氯化,钾0. 2 g,于800 mL水中充分溶解,用浓盐酸调节溶液pH至7. 4,加水定容至1 L,分装后高压灭菌,4. 10氯化钠溶液(0. 9 g/L):称取0. 90 g氯化钠,于800 mL水中充分溶解后,加水定容至1 L,4. 1I乳化缓冲液:取430 mL浓度为0.9 g/L的氯化钠溶液(4. 10),加入10 mL聚乙二醇对异辛基苯,1,NY/T 3050—2016,基酷(TritonX- 1OO)、6O mL无水乙醇(4. 1),混合均匀,4. 12三羟甲基氨基甲烷盐酸(Tris - HC1)溶液(1 mol/L):称取121. 1 g Tris(4. 3),于800 mL水中充,分溶解。冷却至室温后,用盐酸调节溶液的pH至8.0,加水定容至1 L.分装后高压灭菌,4. 13氢氧化钠溶液(10mol/L):称取40.0g氢氧化钠,于80 mL水中充分溶解后,加水定容至100,mL0,4. 14 EDTA溶液(0. 5 mol/ L):称取186. 1 g二水乙二胺四乙酸二钠,加入700 mL水中,在磁力搅拌,器上剧烈搅拌,用!0 mol/L氢氧化钠溶液(4. 13)调pH至8.0,加水定容至1 L,分装后高压灭菌,4. 15澳代十六烷基三甲胺(CTAB)提取缓哂述那取81. 82 g氯化钠、20. 0 g溟代十六烷基三甲,胺(CTAB),于800 mL水中充分蟹后,加入!00 mL Tris-的 溶液(4. 12)和40 mL EDTA溶液,(4. 14),加水定容至]L,分装辰菌。^^^^^^^^^^^^^^^^^,4. 16 Tris饱和苯酚、烷和异畏奔混や:セ)(四工彳ヨセ,4. 17 Tris - EDTA(TE)缓冲液(pH 为 8.0):在 800 mL 水中.,和2 mL EDTA 曾(4.セ螃定容至1 L,翼后高压灭蔥,引物溶液j用灭菌K柄?缓冲液(4. 17)將弓I璽4.,2XTaq j^P**A Taq 聚合酶 サ,50XTAE缓冲液つ称取Tris(4.3)242.0 g,卜700 mL灭菌水中,(4. 14)100 mL,冰乙酸 ア. 1 ー ーJ一 ー"^".亠,4. 21 0. 5X1TA',)+匕,や网"滿mL *is- HC!溶液(4. 12),JlkO,8)讐到10ゆ,05 U/^tL.Mg2^ 3. 0 mmol/ I 各 0. 4 mmol/Lo,加入EDTA溶液,4……

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